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活性氧检测试剂盒(DHR,绿色荧光)图片
产品货号:
HR8686
中文名称:
活性氧检测试剂盒(DHR,绿色荧光)
英文名称:
ROS detection kit(DHR Probe)
产品规格:
200T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒是一种利用荧光探针DHR进行活性氧检测的试剂盒。可以用于各种真核培养细胞、培养或灌流组织及组织冰冻切片的检测。试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂,以便于活性氧的检测。

DHR可自由透过活细胞膜进入细胞内,并被细胞内的ROS氧化,形成发绿色荧光的Rho123,并稳定存在于细胞内。根据活细胞中荧光的产生,可以判断细胞ROS含量的多少和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察,是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS经典检测方法。用488nm激发,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光,从而测定细胞内活性氧水平。

活性氧(Reactive oxygen species,ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。

产品特点:
· 使用方便:可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测;
· 背景低,灵敏度高;
· 线性范围宽,使用方便。

试剂盒组成:
组分规格
DHR荧光探针1μl
探针稀释液1ml
活性氧阳性对照诱导剂1ml

保存条件:-20℃避光,有效期6个月

自备试剂和仪器:
· 培养基
· 移液器及吸头
· 离心机
· 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,激发波长488nm,发射波长530nm。

使用注意事项:
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.对于药物作用时间较短(2小时以内)的细胞,先标记探针,后用药物刺激细胞。对于药物作用时间较长(6小时以上)的细胞,先用活性氧阳性对照诱导剂或相应的药物刺激细胞,后标记探针。
6.阳性对照诱导剂可以按照1:1000的比例使用。例如标记好探针的细胞共1ml,可以加入1μl的阳性对照诱导剂刺激。通常刺激后20-30分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞,活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30分钟内观察不到活性氧的升高,可以适当提高活性氧阳性对照诱导剂的浓度。如果活性氧升高得过快,可以适当降低活性氧阳性对照诱导剂的浓度。
7.DHR在光照和空气中易被氧化,注意避光密封保存。
8.对不同的细胞和组织,应选择合适的孵育时间和浓度,以观察ROS的变化,很多细胞内的ROS绝对水平较低,需要根据实际情况适当延长孵育时间。
9.DHR探针可以根据需要的用量分装后冻存,避免反复冻融。
10.DHR不可以一次性全部稀释后长期保存不用,稀释后稳定性变差,有效期缩短。

使用方法:

DHR探针配制:
根据需要的用量,用探针稀释液5倍稀释DHR探针后充分混匀,避光保存备用。稀释后的DHR荧光探针最好在一个月内用完,尽量避免反复冻融。

DHR探针标记:
1.DHR溶液可在新鲜无血清培养基、缓冲盐溶液或组织灌流液中稀释到所需浓度,100-200倍稀释,以此染色液更换细胞培养液或灌流液;也可直接向无血清细胞孵育液体或灌流液中加入DHR探针溶液至所需浓度。
2.依据细胞ROS含量的不同,DHR终浓度可选择在100-200倍稀释的范围,孵育时间可选择1-4小时,在37℃或室温进行避光孵育。
3.孵育结束后,用PBS等新鲜溶液清洗细胞或组织。漂洗时间要短。

荧光显微镜观察:
1.对贴壁生长细胞或活组织,可直接在荧光显微镜下观察;对悬浮生长细胞,取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上,再盖上一张盖玻片。
2.荧光显微镜下观察。

流式细胞仪分析:
1.对贴壁生长细胞,用胰酶消化制备成单细胞悬液;对悬浮生长细胞,直接收集细胞。用0.5~1ml冰冷PBS重悬细胞(5~10万)。
2.采用488nm波长激发,测定待测细胞平均荧光强度。
相关搜索:活性氧检测试剂盒(DHR,绿色荧光)ROS detection kit(DHR Probe)
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